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文章來(lái)源：procell
外泌體作為細(xì)胞間通訊的重要介質(zhì)，其高純度、高回收率的分離對(duì)下游功能分析、組學(xué)檢測(cè)及疾病診斷至關(guān)重要。然而，傳統(tǒng)外泌體提取方法往往面臨設(shè)備要求高、操作流程復(fù)雜等挑戰(zhàn)。為此，普諾賽®針對(duì)性開(kāi)發(fā)了多種分離方案，以滿足不同樣品類型與研究需求。
在上期細(xì)胞學(xué)堂中，我們梳理了常用的外泌體分離方法，本期我們將進(jìn)一步聚焦普諾賽®推出的四款外泌體分離試劑盒，詳細(xì)解析其核心原理、操作流程、注意事項(xiàng)及優(yōu)勢(shì)，助力您挑選最-適合的產(chǎn)品。
微量外泌體分離試劑盒（磁珠法）
貨號(hào)：
P-CA-501
試劑盒組分：
Exosome Beads、
Solution A、
Elution Buffer
原理概述
利用自主研發(fā)的均相液體磁珠（Exosome Beads），通過(guò)磁珠特異性結(jié)合外泌體而不吸附雜質(zhì)，以及磁性分離技術(shù)，達(dá)到高純度和高回收率的分離效果。
操作流程
1
樣品預(yù)處理：差速離心（300 g，5 min→2000 g，10 min→14000 g，30 min）逐步去除樣品中細(xì)胞、細(xì)胞碎片及大體積顆粒；
2
富集外泌體：向去除了保護(hù)液的磁珠中加入預(yù)處理后的樣品，置于搖床室溫旋轉(zhuǎn)孵育30 min；
3
洗滌：置于磁力架上，靜置30s，棄上清，并用Solution A洗滌，重復(fù)2次，保留磁珠；
4
分離外泌體：加入Elution Buffer后置于搖床室溫旋轉(zhuǎn)孵育30 min；置于磁力架上，靜置30s，轉(zhuǎn)移上清到新的離心管中，該上清即為分離的外泌體。
注意事項(xiàng)
在某些樣品中，磁珠結(jié)合外泌體時(shí)可能會(huì)結(jié)團(tuán)，但不影響分離效果，無(wú)需處理；
完成分離后的外泌體不宜長(zhǎng)時(shí)間在Elution Buffer中保存。若長(zhǎng)時(shí)間保存，可使用超濾管將溶液置換為PBS。
優(yōu)勢(shì)
分離的外泌體純度高且完整性好，適合分離微量或珍貴樣品中外泌體；分離操作簡(jiǎn)便，僅需常規(guī)磁力架，無(wú)需特殊設(shè)備，高通量，能同時(shí)處理多個(gè)樣本，兼容自動(dòng)化操作。
通用外泌體分離試劑盒（SEC法）
貨號(hào)：
P-CA-502/P-CA-503
試劑盒組分：
Exosome Purification Column、
Column Adapter
注：P-CA-502和P-CA-503僅產(chǎn)品規(guī)格和樣品上樣量有區(qū)別，其他操作是一致的。
原理概述
基于分子排阻色譜原理，利用外泌體純化柱（Exosome Purification Column）中的多孔凝膠顆粒作為填料，這些填料顆粒根據(jù)顆粒大小形成不同的孔道，使得在PBS緩沖液流動(dòng)的過(guò)程中，將樣品中外泌體與其他不同尺寸的顆粒進(jìn)行分離。
操作流程
1
樣品預(yù)處理：差速離心（300 g，5 min→2000 g，10 min→14000 g，30 min）逐步去除樣品中細(xì)胞、細(xì)胞碎片及大體積顆粒；
2
純化柱預(yù)處理：將純化柱在室溫平衡30 min，檢查并排除空氣，PBS平衡純化柱；
3
外泌體分離：待樣品完-全進(jìn)入純化柱，分批加入0.5 mL PBS，并收集流穿液，其中4-8號(hào)管（P-CA-502）或8-12號(hào)管（P-CA-503）中收集的流穿液即為分離的外泌體；
4
純化柱維護(hù)：先后加入PBS和20%乙醇清洗純化柱，再將純化柱加滿20%乙醇密封，于4℃保存。
注意事項(xiàng)
本操作中使用的PBS和20%乙醇建議現(xiàn)配現(xiàn)用，同時(shí)經(jīng)0.2 μm濾膜過(guò)濾、超聲或真空脫氣，避免造成純化柱出現(xiàn)大量氣泡，影響分離效果；
純化柱使用前需充分平衡至室溫（18-25℃），溫度過(guò)低或過(guò)高，都會(huì)影響外泌體分離效果；
純化柱中間不能有氣泡，使用前后需認(rèn)真檢查，避免影響外泌體分離效果；
純化柱可以反復(fù)利用，但多次使用會(huì)影響純化效果，建議重復(fù)使用不超過(guò)5次；
當(dāng)分離的外泌體進(jìn)行NGS或者其他組學(xué)分析時(shí)，為避免交叉污染，建議每個(gè)樣品使用一支新的純化柱。
優(yōu)勢(shì)
分離的外泌體純度高、回收率高；操作簡(jiǎn)單，無(wú)需專業(yè)的純化設(shè)備，可獲得無(wú)蛋白污染、用于鑒定檢測(cè)和功能研究的高質(zhì)量外泌體。
離心柱式外泌體分離試劑盒
貨號(hào)：
P-CA-504
試劑盒組分：
Spin Column 01、
Collection Tubes (2 mL)、
Solution A
原理概述
離心柱中裝填的介質(zhì)能無(wú)差別吸附雜質(zhì)而不結(jié)合外泌體，利用離心力實(shí)現(xiàn)樣品中外泌體與雜質(zhì)的分離。此法不僅可快速分離外泌體，還可去除游離的外泌體標(biāo)記染料。
操作流程
1
樣品預(yù)處理：差速離心（300 g，5 min→2000 g，10 min→14000 g，30 min）逐步去除樣品中細(xì)胞、細(xì)胞碎片及大體積顆粒；
2
離心柱預(yù)處理：棄去離心柱（Spin Column 01）上層的保護(hù)液體，加入Solution A離心洗滌；
3
外泌體分離：將預(yù)處理后的樣品加入離心柱中，離心獲得的洗脫液即為分離的外泌體。
注意事項(xiàng)
單個(gè)離心柱最大上樣體積為500 μL，若樣品體積超過(guò)500 μL，則建議試用50 kDa超濾管濃縮樣品至0.5 mL，注意濃縮體積不超過(guò)20倍；
對(duì)高粘度樣品，如血漿、血清、胸腹水等樣本，可用等體積去離子水稀釋再加入到離心柱中；
對(duì)雜質(zhì)較多的樣品，如血漿、血清、胸腹水、牛奶等樣本，建議用PBS稀釋10倍后，經(jīng)過(guò)50 kDa超濾管濃縮10倍；然后加入剩余液體10倍體積的PBS，超濾濃縮10倍后，再用離心柱分離外泌體；
離心法分離時(shí)，控制離心力在300-500×g；若樣品粘度大，可適當(dāng)增加離心力，以確保分離效果。
優(yōu)勢(shì)
外泌體分離操作簡(jiǎn)便、高純度和高富集量，無(wú)需磁力架、超速離心機(jī)等特殊設(shè)備；能去除游離的外泌體標(biāo)記染料。
外泌體分離試劑盒（沉淀法）
貨號(hào)：
P-CA-505
試劑盒組分：
Exosome Precipitation Solution、
Solution A
原理概述
通過(guò)添加特定的試劑（如Exosome Precipitation Solution），使樣品中的外泌體迅速聚集沉降，再通過(guò)離心收集沉淀中的外泌體。
操作流程
1
樣品預(yù)處理：差速離心（300 g，5 min→2000 g，10 min→14000 g，30 min）逐步去除樣品中細(xì)胞、細(xì)胞碎片及大體積顆粒；
2
沉淀外泌體：血清/血漿樣品按照樣品:Solution A:Exosome Precipitation Solution=2:2:1的體積比混勻；細(xì)胞培養(yǎng)上清/尿液樣品按照樣品:Exosome Precipitation Solution=4:1的體積比混勻；室溫孵育30 min或4℃孵育過(guò)夜；
3
外泌體回收：高速離心，吸棄上清，向沉淀中加入Solution A重懸沉淀，再次離心收集上清，即為分離的外泌體。
注意事項(xiàng)
注意樣品與各試劑的體積比，嚴(yán)格按照推薦比例操作；
細(xì)胞培養(yǎng)上清或尿液樣品體積過(guò)大，可以先進(jìn)行濃縮再進(jìn)行沉淀；
操作要輕柔，吸棄上清時(shí)避免吸到沉淀影響外泌體得率；
實(shí)驗(yàn)時(shí)間允許情況下，為保證外泌體分離的高回收率，推薦4℃孵育過(guò)夜。
優(yōu)勢(shì)
適用樣品廣，外泌體回收率高、重復(fù)性好；無(wú)需特殊設(shè)備，操作簡(jiǎn)便快速，能同時(shí)處理多個(gè)樣本。
希望這篇關(guān)于外泌體分離試劑盒的選用指南能幫助到您！更多細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)干貨，請(qǐng)持續(xù)關(guān)注細(xì)胞學(xué)堂專欄~
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